Evaluación de la presencia de microorganismos en orina en personas sanas mediante urocultivo estándar y expandido

Abstract

Introducción: Clásicamente se consideraba la vejiga un órgano estéril y que las infecciones del tracto urinario (ITU) se relacionaban con bacterias de origen intestinal. La bacteriuria asintomática se define por la presencia en orina de 2100.000 UFC/mL. Algunos trabajos recientes han puesto en evidencia la existencia de una microbiota asociada al tracto urinario en sujetos sanos. En el presente trabajo nos propusimos evaluar la presencia de bacterias en la orina de personas asintomáticas utilizando distintos métodos de cultivo y determinar la presencia de bacterias dentro de las células de vejiga. Metodología: La orina de 10 voluntarios sanos se recolectó mediante la técnica de chorro medio. Las muestras se sembraron mediante urocultivo estándar (10 ul de orina en Agar Sangre y Agar Mc Conkey lactosa a 37°C durante 48 hs) y en 3 condiciones diferentes A (100 ul en Agar Sangre/Mc Conkey lactosa 37°C durante 48 hs), B (10 y 100 ul Agar Sangre y Chocolate, 5%C02, 48 hs) y C (10 y 100 ul Agar Sangre Anaerobio, MRS, microaerofilia, 48 hs). De cada condición de cultivo se seleccionaron colonias de distinta morfología y se criopreservaron para su identificación por MALDI-TOF. La presencia de bacterias intracelulares se evaluó mediante una técnica desarrollada por nuestro grupo basada en centrifugación de la orina, eliminación de las bacterias extracelulares y lisado de las células eucariotas. Las bacterias así liberadas se cultivaron en Agar Sangre a 37°C durante 48 hs. Por último, se evaluó la sospecha de bacterias intracelulares por microscopía óptica con May Grunwald Giemsa (MGG), y se confirmó su presencia mediante Microscopia láser confocal (MLC). Resultados: Si se compara la presencia/ausencia de crecimiento bacteriano en urocultivo estándar observamos que de las 10 muestras (7 mujeres y 3 hombres), 6 muestras de mujeres desarrollaron microorganismos mientras que tan solo 1 hombre tuvo crecimiento bacteriano en la orina. Si consideramos la presencia/ausencia de una bacteriuria significativa en urocultivo estándar como un recuento mayor a 1x105 UFC/ml, observamos que un solo caso, en una mujer, fue positivo. Por otro lado, si consideramos en el sistema de urocultivo expandido (EQUC) la presencia de bacteriuria significativa como un recuento mayor a 1x105 UFC/ml observamos 6 muestras positivas provenientes de mujeres. Respecto a la detección de bacterias intracelulares por técnica de cultivo, se observó presencia en 6 muestras de orina, y 3 muestras de esas fueron negativas al urocultivo estándar y EQUC. Con la tinción de MGG y microscopia óptica se evidenció la presencia de células epiteliales, y bacterias sugestivas de estar intracelulares en 7 muestras de orina. Mediante MLC, en 3 de esas 7 muestras se confirmó la presencia de bacterias intracelulares. Conclusiones: Estos estudios preliminares indican que la realización de EQUC permite el crecimiento de un mayor número de UFC/ml y de diversidad de microorganismos que el urocultivo estándar, demostrando la existencia de una microbiota urinaria normal. Los aislamientos obtenidos se identificarán por MALDI-TOF. Además, se estudiará la composición del microbioma urinario por secuenciación del ARN ribosomal 16S.