Informe final del proyecto: Estandarización del diagnóstico in vitro de alergia contra antibióticos lactámicos usando anticuerpos monodominio

Abstract

En este proyecto se exploró el uso nanobodies como reactivos estandarizados que pueden sustituir a los estándares biológicos utilizados en muchos métodos diagnósticos. Comúnmente, los inmunoensayos serológicos y los kits de diagnóstico incluyen sueros de estandarizados obtenidos de pacientes (calibradores) que contienen cierta cantidad de anticuerpo que se quiere medir, y que se utilizan como referencia para la cuantificación de estos anticuerpos en los pacientes bajo estudio. Sin embargo, en algunos casos, como el diagnóstico de alergias o enfermedades autoinmunes, suele ser difícil disponer de cantidades suficientes de estos patrones de referencia, y también existen limitaciones en su reproducibilidad lote a lote y estandarización a lo largo del tiempo. Para superar esta dificultad, este trabajo exploró el uso de calibradores recombinantes sustitutos formulados sobre la base de dos anticuerpos de dominio único (nanobodies (Nbs)) combinados a través de un conector peptídico corto para producir una construcción biespecífica (Nb1-Nb2) recombinante. Esta construcción Nb1-Nb2 se comporta en forma similar al anticuerpo a determinar, dado que uno de los Nbs se une al antígeno blanco y el segundo es específico para el paratope del anticuerpo de detección secundario. Por su naturaleza, el Nb biespecífico hereda las propiedades excepcionales de estabilidad y producción a bajo costo por fermentación bacteriana de los nanobodies originales y, una vez calibrado contra el estándar de referencia biológico, puede reproducirse indefinidamente a partir de su secuencia de una manera altamente estandarizada. Como prueba de concepto, generamos y caracterizamos calibradores biespecíficos basados en nanobodies con potencial aplicación en el diagnóstico de alergia contra los antibióticos lactámicos aztreonam, amoxicilina, penicilina,