Informe final del proyecto: Generación de herramientas biotecnológicas para análisis de glicanos biológicos, basadas en la inmovilización de glicosidasas

Abstract

Los glicanos presentes en glicolípidos y glicoproteínas participan en numerosos procesos fisiológicos. Por lo cual una alteración en sus patrones de glicosilación se traduce en enfermedades tales como desórdenes congénitos de la glicosilación, enfermedades autoinmunes, infecciosas o inflamatorias crónicas y cáncer. Los carbohidratos también se encuentran involucrados en procesos de infección parasitaria o viral, participando tanto en su propagación como en la evasión de la respuesta inmune del hospedero. Conociendo la estructura y función de los glicanos es posible comprender el rol que desempeñan en procesos infecciosos o en el desarrollo de algunas enfermedades, lo que permite el diseño de métodos de diagnóstico y tratamientos terapéuticos. Las glicosidasas inmovilizadas son herramientas excelentes para esta finalidad ya que hacen posible la remoción selectiva de glicanos sin alterar la estructura tridimensional de las glicoproteínas. Esto permite la evaluación de las moléculas deglicosiladas en procesos biológicos, de forma de determinar la relevancia del glicano removido en el mismo. Presentan como ventaja adicional su fácil remoción del medio de reacción y su reuso. Dado la relevancia de la manosa y la fucosa en los procesos biológicos protagonizados por los parásitos, área en la que nuestro grupo tiene experiencia, el objetivo de este proyecto fue la búsqueda de enzimas con actividad alfa-manosidasa y alfa-fucosidasa en microorganismos autóctonos de forma de aumentar la disponibilidad de enzimas aplicables en glicobiología. El desarrollo del mismo permitió la identificación y purificación de una alfa-manosidasas y una alfa fucosidasa proveniente de hongos filamentosos. Por otra parte fue posible la inmovilización de una alfa-manosidasa y una alfa-fucosidasa comercial, la validación de su funcionalidad para la remoción selectiva de glicanos y su aplicación a la elucidación del rol de la manosa y la fucosa en la activación de la respuesta inmune innata del hospedero por parte de glicoproteínas de Tripanosoma cruzi.