Diferenciación y caracterización de células Nurse-Like a partir de monocitos de sangre periférica provenientes de pacientes con Leucemia Linfoide Crónica

Abstract

La Leucemia Linfoide Crónica (LLC) es una neoplasia maligna de células B. Se caracteriza por la acumulación de pequeños linfocitos B monoclonales de apariencia madura en sangre periférica, médula ósea y órganos linfoides secundarios. Actualmente, es la leucemia en adultos más frecuente en países occidentales. Sin embargo, a pesar de los avances en nuevas estrategias terapéuticas, la LLC sigue siendo una enfermedad incurable. Clínicamente la presentación de la enfermedad y la respuesta al tratamiento son sumamente heterogéneas, en parte determinado por la compleja relación que tienen las células leucémicas con el microambiente circundante. Uno de los componentes claves de este microambiente tumoral son las nurse-like cells (NLC), que generan nichos específicos potenciando la supervivencia de las células cancerosas y la resistencia a los tratamientos. No obstante, la obtención de estas células in vitro no ha sido bien estandarizada, y por lo tanto los mecanismos moleculares que inducen su diferenciación aún no se comprenden completamente. El objetivo de este trabajo fue estandarizar una metodología para la diferenciación de NLC in vitro, permitiendo posteriormente su caracterización fenotípica. A partir del aislamiento de células mononucleares de sangre periférica (CMSP) provenientes de muestras de pacientes con LLC se evaluó el desarrollo de NLC. Logrando finalmente generar un protocolo de cultivo de referencia para su obtención. Este hecho permitió confirmar que el número de NLC diferenciadas varía considerablemente entre muestras de distintos pacientes. Mediante técnicas de microscopía confocal y citometría de flujo caracterizamos las células diferenciadas, detectando una heterogeneidad en la expresión de marcadores típicos de NLC (CD68, CD163, CD206) y de marcadores inmunosupresores en pacientes con distinto perfil clínico. A su vez, pude demostrar el efecto positivo de las NLC sobre la viabilidad de las células leucémicas. Con el fin de solventar la marcada variación en el desarrollo de NLC, evalué la línea celular THP-1 como modelo representativo de NLC. Verificando que las mismas, una vez diferenciadas, son similares morfológica y fenotípicamente a las NLC. Adicionalmente, comprobé que en condiciones de co-cultivo THP-1 también fue capaz de interaccionar con las células leucémicas, contribuyendo a disminuir la apoptosis espontánea. Por tanto, los resultados de esta investigación conforman una sólida base que permitirá en futuros estudios explorar el potencial biológico de las NLC como un nuevo blanco terapéutico en el tratamiento de la LLC.