Estudios preclínicos de seis moléculas que interfieren en el ensamblaje de la cápside del VIH como posibles fármacos antirretrovirales

Abstract

La cápside del VIH está formada por el ensamblaje de una única proteína viral (CA), que desempeña un papel esencial en las primeras y últimas etapas de la infección. El ensamblaje correcto de la cápside es necesario para la infectividad del VIH. La alta conservación de la secuencia de aminoácidos de la CA y su alta sensibilidad a las mutaciones evidencian su papel en el éxito del ciclo viral y respaldan la investigación de moléculas capaces de interferir en la multimerización de la CA como posibles fármacos antirretrovirales. Se llevó a cabo un cribado virtual masivo de moléculas capaces de interactuar con una región superficial conservada situada en la interfaz entre los monómeros de CA. A partir de este cribado, se encontraron 84 compuestos que interactuaban con la interfaz CA-CA, y se seleccionaron para realizar estudios adicionales. Se realizaron ensayos de interacción compuesto-proteína con la proteína CA o con una proteína de fusión de CA y la proteína nucleocápsida (NC) denominada CA-NC. Se analizó el efecto de estos compuestos sobre el ensamblaje in vitro de la CA-NC recombinante utilizando una dosis fija de los compuestos, y se descubrió que 6 de ellos pueden interferir en su multimerización (C3, C6, C11, C19, C29 y C37). También se realizaron ensayos de termoforesis a microescala con CA de tipo salvaje y CA mutante, así como con CA del virus de la inmunodeficiencia felina, obteniéndose constantes de disociación (Kd) inferiores a 500 μM en todos los casos. Se realizó un acoplamiento molecular centrándose en una segunda posición preferida en la interfaz entre monómeros y se probaron 288 condiciones cristalográficas diferentes con el fin de obtener la proteína CA-NC cocristalizada con los compuestos. Por último, se estudió la interferencia de los compuestos con el ciclo de infección viral utilizando un modelo de infección por VIH in vitro. Estos resultados nos animan a realizar más estudios y desarrollar estas moléculas como posibles fármacos para el tratamiento de la infección por VIH.