Aplicación de la técnica LAMP para la detección de genes de virulencia de STEC en muestras ambientales de agua y fecas de fauna nativa

Abstract

El virotipo Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es un patógeno zoonótico y los bovinos son su reservorio principal. En humanos puede producir desde diarrea hasta síndrome urémico hemolítico, asociándose a brotes graves con mortalidad. Además de contaminar alimentos STEC puede persistir en el ambiente, por ejemplo en sistemas acuáticos y animales, constituyendo una importante preocupación para la salud pública. Es por tanto relevante contar con un método rápido y sensible para detectar estos patógenos en el ambiente. La amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) es un método basado en ácidos nucleicos rápido, preciso y fácil de realizar en condiciones de laboratorio y en el campo. El objetivo del trabajo fue poner a punto un protocolo de LAMP para detectar STEC en muestras ambientales. Se emplearon primers de la literatura para detectar los genes de virulencia stx1, stx2 (toxinas Shiga 1 y 2), rfbE (marcador O157:H7) y uidA (β-glucuronidasa E. coli), que se ensayaron en cepas STEC de referencia (ATCC). Una vez confirmada la especificidad de los primers, se aplicó el protocolo a fecas de guazubirá, ñandú y carpincho y a muestras de agua obtenidas de la microcuenca del arroyo Los Chanchos (Villa Serrana). Las muestras se procesaron con y sin pre-enriquecimiento en TSB. Se detectó STEC-stx2+ tanto en muestras de agua como en los enriquecimientos de diferentes puntos de la microcuenca, y ausencia de STEC en fecas. La técnica de LAMP para STEC redujo considerablemente el tiempo de detección del patógeno y evidenció su utilidad para monitoreo ambiental.