Informe final del proyecto: Profundización en la identificación de determinantes estructurales y funcionales de UreA

Abstract

En el hongo filamentoso Aspergillus nidulans el transporte de urea tiene lugar a través de UreA, un simportador urea/H+ con ortólogos en hongos y plantas, perteneciente a la familia de los simportadores de sodio (SSS). Nuestro grupo llevó a cabo un estudio de la relación estructura- función de UreA mediante una estrategia de mutagénesis y modelado tridimensional. El mismo permitió identificar una serie de aminoácidos implicados en la unión, reconocimiento y translocación de la urea por parte del transportador. En este proyecto se propuso ahondar en el conocimiento de los determinantes estructurales y funcionales de UreA, mediante la identificación de nuevos residuos o regiones de UreA implicadas en la unión al sustrato y la selectividad por el mismo. En este sentido pudimos determinar que los aminoácidos W82, W84, N279 y T282 cumplen un rol en la interacción y/o selectividad por el sustrato, proponiendo a su vez, que la región en donde éstos se encuentran comprendería el sitio de unión al sustrato de UreA. Asimismo se realizó un análisis de los “loops” extracelulares 3 e intracelular 7, determinando que éstos poseen un rol estructural y funcional en UreA. Ya que la oligomerización de transportadores es un fenómeno que aparece con frecuencia en la biología de los mismos, pero no se conoce cuán general es ésta ni cuál es su rol para cada clase de proteínas de transporte, nos propusimos aportar a esta temática determinando si UreA es capaz de formar oligómeros. Se obtuvieron resultados preliminares que indicarían que UreA oligomeriza. Actualmente estamos realizando experimentos adicionales para confirmar ésto. Creemos que los resultados obtenidos en este proyecto contribuyen al conocimiento de la relación estructura/función de transportadores de hongos y plantas, así como en la determinación de la especificidad de transportadores en general.