Informe final del proyecto: Diagnóstico diferencial de infecciones agudas versus crónicas utilizando nanobodies y calibradores recombinantes como reactivos universales para la detección de IgM

Abstract

El diagnóstico serológico de infecciones en curso es crítico para definir el tratamiento a emplear, prevenir problemas durante la gestación (ej. toxoplasmosis), controles en trasplantes, transfusiones de sangre y epidemiología. La respuesta de anticuerpos IgM es un parámetro relevante en este tipo de diagnóstico por su aparición temprana en suero durante las infecciones. Dicha respuesta puede ser medida por inmunoensayos de serología que utilizan superficies de captura con anticuerpos convencionales anti-IgM de alta especificidad. La primera meta de este proyecto consistió en desarrollar un reactivo anti-IgM genérico altamente estandarizado basado en nanobodies biotinilados capaces de inmovilizarse en forma orientada y generar superficies de alta eficiencia de captura. Para esto se siguió una metodología que permitió la obtención de nanobodies que demostraron buen desempeño para captura de IgM mediante su evaluación en inmunoensayos modelo de diagnóstico para los virus Dengue y Zika. Otra meta del proyecto consistió en desarrollar calibradores recombinantes para inmunoensayos serológicos. Los calibradores permiten discriminar entre sueros positivos y negativos, y típicamente se formulan utilizando sueros estándares caracterizados. Debido a que son finitos, cada vez que los sueros se agotan nuevos lotes deben ser generados y validados, elevando los costos de los kits diagnósticos. En este trabajo se desarrolló un calibrador constituido por una quimera nanobody-Fc. El componente Fc contiene los dominios constantes de IgM humana y es reconocido por el nanobody anti-IgM, y el componente nanobody es específico contra el antígeno del inmunoensayo serológico, en este caso se utilizó un nanobody anti-NS1 de Zika como modelo. La quimera fue producida con altos rendimientos a partir de cultivos de células de mamíferos y demostró ser funcional en los inmunoensayos. Tanto los nanobodies anti-IgM como el calibrador se presentan como valorables herramientas en el área diagnostico capaces de mejorar la estandarización de las pruebas de diagnóstico de infecciones agudas.